ГОСТ 23231—90. Колбасы и продукты мясные вареные
Метод определения остаточной активности кислой фосфатазы
Настоящий стандарт распространяется на вареные колбасы, сосиски, сардельки и вареные продукты из свинины и устанавливает метод определения остаточной активности кислой фосфатазы.
Метод основан на фотометрическом определении в продукте интенсивности развивающейся окраски, зависящей от остаточной активности кислой фосфатазы, выраженной массовой долей фенола.
Метод применяют в случае сомнения в проваренности продукта.
1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
1.1. Отбор проб — по ГОСТ 9792.
1.2. Точечные пробы продуктов из свинины должны быть освобождены от жировой ткани и шкурки, а точечные пробы вареных колбас, сосисок и сарделек — от оболочки и шпика.
1.3. Для составления объединенной пробы точечные пробы соединяют, дважды измельчают на бытовой или электрической мясорубке и тщательно перемешивают. Объединенную пробу помещают в стеклянную или пластмассовую банку вместимостью 200-400 см. куб, заполнив ее полностью, и закрывают крышкой.
1.4. Объединенную пробу, подготовленную для испытания, хранят при температуре (4 ± 2) С до окончания испытаний.
2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469 с отверстиями решетки диаметром от 3 до 4 мм.
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 2-го класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г.
Потенциометр с погрешностью измерения ± 0,06 рН.
Калориметр фотоэлектрический лабораторный с устройством для отсчитывания значения оптической плотности и светофильтром с нм или спектрофотометр для измерения в видимой области спектра.
Ультратермостат или водяная баня, обеспечивающие регулирование температуры от 30 до 99 С.
Воронки В-36-80 ХС, В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 2-500—2, 2—1000—2 по ГОСТ 1770, вымеренные на наливной объем.
Пипетки 4-2-1, 4-2-2, 7-2-5, 7-2-10 по ГОСТ 29169.
Холодильник ХШ-1-400-29/32 ХС по ГОСТ 25336.
Колба К-1-2000-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.
Пробирки П1-16-150 ХС, П1-21-200 ХС, П1-25-200 ХС по ГОСТ 25336.
Палочки стеклянные.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Груша резиновая.
Кислота лимонная по ГОСТ 3652, х. ч.
Натрий лимоннокислый 5-водный по ГОСТ 22280, ч. д. а.
Фенилфосфорной кислоты динатриевая соль по ТУ 6—09—3752, свежеприготовленный раствор 2 г/дм куб.
Кислота трихлоруксусная кристаллическая по ТУ 6—09—1926, растворы 50 и 200 г/дм куб.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х. ч., гранулированная, раствор с (NaOH) =0,5 моль/дм куб.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Фенол по ТУ 6-09—5303, ч. д. а.
Толуол по ГОСТ 5789, ч. д. а.
Натрий вольфрамовокислый 2-водный по ГОСТ 18289, х. ч.
Натрий молибденовокислый по ГОСТ 10931, ч. д. а.
Литий сернокислый 1-водный по ТУ 6—09—5299, х. ч.
Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552, х. ч., плотностью 1,72 г/см куб.
Кислота соляная по ГОСТ 3118, х. ч., плотностью 1,19 г/см куб.
Бром по ГОСТ 4109, х. ч.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками, а также реактивов с качественными показателями не ниже указанных в настоящем стандарте.
3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ
3.1. Приготовление нитратного буфера. В мерной колбе вместимостью 1000 см куб в дистиллированной воде растворяют 13,88 г лимоннокислого натрия и 0,588 г лимонной кислоты, доливают водой до метки и перемешивают, рН буфера 6,5. Затем добавляют 1 см куб толуола. Раствор хранят в холодильнике при температуре (4 ± 1) С не более 12 сут.
3.2. Приготовление реактива Фолина 100 г вольфрамовокислого натрия и 25 г молибденовокислого натрия растворяют в 700 см куб дистиллированной воды. К раствору добавляют 50 см куб ортофосфорной кислоты и 100 см куб соляной кислоты. Смесь осторожно кипятят в течение 10 ч в колбе вместимостью 2000 см куб с обратным холодильником, после чего охлаждают и добавляют 150 г сернокислого лития, 50 см куб воды и несколько капель брома. Остаток брома отгоняют кипячением смеси без холодильника в вытяжном шкафу, охлаждают, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см куб, доводят объем дистиллированной водой до метки, перемешивают и фильтруют. Реактив должен быть золотисто-желтого цвета без зеленого оттенка. Реактив хранят в склянке с притертой пробкой в темном месте не более 6 мес.
3.3. Приготовление стандартного раствора 2 г фенола (результат взвешивания записывают до третьего десятичного знака) растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1000 см куб, доводят объем до метки и перемешивают. Отбирают пипеткой с помощью резиновой груши 5 см куб раствора в колбу вместимостью 500 см куб, добавляют около 300 см куб дистиллированной воды, вносят 25 г кристаллической трихлоруксусной кислоты. После растворения содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. Полученный раствор содержит 20 мкг фенола в 1 см куб.
3.4. Построение градуировочного графика. В пробирки вносят следующие объемы стандартного раствора: 0;0,25; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 см куб, что соответствует массе фенола: 0; 5; 10; 20; 30; 40 мкг. Доводят объем в каждой пробирке до 2,5 см куб, добавляя соответствующий объем 50 г/дм куб раствора трихлоруксусной кислоты (2,5; 2,25; 2,0; 1,5; 1,0; 0,5 см куб) и перемешивая. В каждую пробирку добавляют 5 см куб 0,5 моль/дм куб раствора гидроокиси натрия, перемешивают, выдерживают 10 мин и добавляют 1,5 см куб реактива Фолина, разведенного дистиллированной водой в соотношении 1: 2 и перемешивают. Через 30 мин измеряют оптическую плотность растворов по отношению к 50 г/см куб раствору трихлоруксусной кислоты на фотоэлектрическом калориметре с применением светофильтра с нм в кювете с расстоянием между рабочими гранями 10 мм или на спектрофотометре при длине волны 600 нм в кювете аналогичного размера. По полученным средним данным по трем стандартным растворам на миллиметровой бумаге размером 20х20 см строят градуировочный график. На оси абсцисс откладывают значение массовой доли фенола (микрограмм в 9 см куб окрашенного раствора); на оси ординат — значение соответствующей оптической плотности (D). Градуировочный график должен проходить через начало координат. Пример градуировочного графика приведен в приложении.
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
4.1. От объединенной пробы, подготовленной к испытанию, берут две навески массой по 1 г (результат взвешивания записывают до третьего десятичного знака) и переносят в две пробирки (одна — контрольная, другая — опытная).
В пробирки вносят по 10 см куб нитратного буфера рН 6,5, тщательно перемешивают стеклянной палочкой и настаивают в течение 20 мин при комнатной температуре, периодически перемешивая.
В контрольную пробирку добавляют 5 см куб 200 г/дм куб раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и добавляют 5 см куб 2 г/дм куб раствора динатриевой соли фенилфосфорной кислоты, выдерживают 10 мин и фильтруют.
В опытную пробирку добавляют 5 см куб 2 г/дм куб раствора динатриевой соли фенилфосфорной кислоты и помещают в ультратермостат при температуре (39 ± 1) С на 1 ч, затем добавляют 5 см куб 200 г/дм куб раствора трихлоруксусной кислоты, выдерживают 10 мин и фильтруют.
Для проведения цветной реакции из контрольной и опытной пробирок отбирают по 2,5 см куб безбелкового фильтрата. Цветную реакцию проводят по п. 3.4. Массовую долю фенола определяют по градуировочному графику.
5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1. Массовую долю фенола X, %, вычисляют по формуле. Вычисление проводят до четвертого десятичного знака.
5.2. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми при Р = 0,95 не должно превышать 10 % по отношению к среднему арифметическому. Окончательный результат определяют до третьего десятичного знака.
5.3. Допускаемое расхождение между результатами испытаний, проведенных в двух разных лабораториях, при Р= 0,95 не должно превышать 25 % по отношению к среднему арифметическому значению.
5.4. Значение среднего квадратического отклонения случайной составляющей погрешности измерений массовой доли фенола одной и той же пробы в разных лабораториях при допускаемых методикой изменениях влияющих факторов составляет 0,0002 Х (средн.)